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一文學會選擇液相色譜的6種檢測器

更新時間:2021-05-14      點擊次數(shù):4120
  檢測器的作用是將色譜柱流岀物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號。液相色譜檢測器共有6種,檢測不同的物質(zhì)選擇不同的檢測器,今天,小析姐就和小伙伴一起看看各種檢測的原理及選擇方法。
 
  檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發(fā)光等。
 
  檢測器分類
 
  A.選擇性檢測器:組分性質(zhì)
 
  1、紫外可見吸收檢測器(UVD)
 
  2、熒光檢測器(FD)
 
  B.通用型檢測器:總體性質(zhì)
 
  3、蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)
 
  4、電化學檢測器(ED)
 
  5、示差折光檢測器(RID)
 
  01.紫外可見吸收檢測器
 
  紫外可見吸收檢測器(ultraviolet-visibledetector,UVD)是HPLC中應用*泛的檢測器之一,幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高,線性范圍寬,噪聲低,適用于梯度洗脫,對強吸收物質(zhì)檢測限可達1ng,檢測后不破壞樣品,可用于制備,并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似,實際上就是裝有流動地的紫外可見光度計。
 
  (1)紫外吸收檢測器
 
  紫外吸收檢測器常用氘燈作光源,氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長,并安裝一個光柵型單色器,其波長選擇范圍寬(190nm~800nm)。它有兩個流通池,一個作參比,一個作測量用,光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上,若兩流通池都通過純的均勻溶劑,則它們在紫外波長下幾乎無吸收,光電管上接受到的輻射強度相等,無信號輸出。當組分進入測量池時,吸收一定的紫外光,使兩光電管接受到的輻射強度不等,這時有信號輸出,輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。
 
  局限:流動相的選擇受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動相,每種溶劑都有截止波長,當小于該截止波長的紫外光通過溶劑時,溶劑的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長。
 
  (2)光電二極管陣列檢測器(photodiodearraydetector,PDAD)
 
  也稱快速掃描紫外可見分光檢測器,是一種新型的光吸收式檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,構(gòu)成多通道并行工作,同時檢測由光柵分光,再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號,然后對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應的光譜數(shù)據(jù),從而迅速決定具有*性和靈敏度的波長。
 
  單光束二極管陣列檢測器,光源發(fā)出的光先通過檢測池,透射光由全息光柵色散成多色光,射到陣列元件上,使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學的方法快速掃描提取出來,每幅圖象僅需要10ms,遠遠超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。
 
  02.熒光檢測器
 
  熒光檢測器(fluorescencedetector,F(xiàn)D)是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器,可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學衍生化生成熒光衍生物,再進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1ng/ml,適用于痕量分析;一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級,但其線性范圍不如紫外檢測器寬。
 
  近年來,采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比,因而具有很高的靈敏度,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應用。
 
  03.示差折光檢測器
 
  示差折光檢測器(differentialrefractiveIndexdetector,RID)是一種濃度型通用檢測器,對所有溶質(zhì)都有響應,某些不能用選擇性檢測器檢測的組分,如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等,可用示差檢測器檢測。示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。
 
  光從一種介質(zhì)進入另一種介質(zhì)時,由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同,就可被檢測,二者相差愈大,靈敏度愈高,在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。
 
  04
 
  電化學檢測器
 
  電化學檢測器(electrochemicaldetector,ED)主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導等檢測器,屬選擇性檢測器,可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機和有機陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測定中獲得了廣泛的應用。其中,電導檢測器在離子色譜中應用最多。
 
  電化學檢測器的優(yōu)點是:
 
 ?、凫`敏度高,最小檢測量~般為ng級,有目可達pg級;
 
 ?、谶x擇性好,可測定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì);
 
  ③線性范圍寬,一般為4~5個數(shù)量級;
 
 ?、茉O備簡單,成本較低;
 
 ?、菀子谧詣硬僮?。
 
  05.化學發(fā)光檢測器
 
  化學發(fā)光檢測器(Chemiluminescencedetector,CD)是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器,因其設備簡單、價廉、線性范圍寬等優(yōu)點。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進行化學反應,生成處于激發(fā)態(tài)勢反應中間體或反應產(chǎn)物,當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時,就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學反應,故叫作化學發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后,立即與適當?shù)幕瘜W發(fā)光試劑混合,引起化學反應,導致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射,其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比。
 
  這種檢測器不需要光源,也不需要復雜的光學系統(tǒng),只要有恒流泵,將化學發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中,使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學發(fā)光,通過光電倍增管將光信號變成電信號,就可進行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達10-12g。
 
  06.蒸發(fā)光散射檢測器
 
  蒸發(fā)光散射檢測器(EvaporativeLight-scatteringDetector,ELSD),能檢測不含發(fā)色團的化合物,如:碳水化合物、脂類、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性劑、藥物(人參皂苷、黃芪甲苷),并在沒有標準品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測未知化合物。
 
  蒸發(fā)光散射檢測器的*檢測原理為,首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠,然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā),最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。
 
  1、霧化:
 
  液體流動相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細小的液滴,從而使溶劑更易于蒸發(fā)。液滴的大小和均勻性是保證檢測器的靈敏度和重復性的重要因素。蒸發(fā)光散射檢測器,通過對氣壓和溫度的精確控制,確保在霧化室內(nèi)形成一個較窄的液滴尺寸分布,使液滴蒸發(fā)所需要的溫度大大降低。
 
  2、蒸發(fā):
 
  載氣把液滴從霧化室運送到漂移管進行蒸發(fā)。在漂移管中,溶劑被除去,留下微?;蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。蒸發(fā)光散射檢測器采用低溫蒸發(fā)模式,維持了顆粒的均勻性,對半揮發(fā)性物質(zhì)和熱敏性化合物同樣具有較好的靈敏度。
 
  3、檢測:
 
  光源采用激光,溶質(zhì)顆粒從漂移管出來后進入光檢測池,并穿過激光光束。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過光電倍增管進行收集。溶質(zhì)顆粒在進入光檢測池時被輔助載氣所包封,避免溶質(zhì)在檢測池內(nèi)的分散和沉淀在壁上,極大增強了檢測靈敏度并極大地降低了檢測池表面的污染。
 
  不同于紫外和熒光檢測器,ELSD的響應不依賴與樣品的光學特性,任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測,不受其官能團的影響。敏度比示差折光檢測器高,對溫度變化不敏感,基線穩(wěn)定,適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。
 

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